Srovnání standartních vyšetřovacích metod s rapid testem pro průkaz Trichomonas vaginalis
Cílem testu bylo zhodnotit citlivost rapid testu pro diagnostiku Trichomonas vaginalis. Pracovali jsme s axenickými kulturami a do testu zahrnuli tři metody: mikroskopické odečítání barveného preparátu a kultivační vyšetření jako zástupce standartních vyšetřovacích metod a testovaný rapid test.
Popis metod
- Mikroskopické odečítání barveného preparátu: suchý poševní nátěr fixovaný na podložní sklo a barvený dle Giemsa-Romanowski
- Kultivační vyšetření: mikroskopická diagnostika ze Szenešových půd, odečet v 1. až 7. dni kultivace
- Rapid test: rychlý imunochromatografický test Trichomonas Rapid Test od firmy OSOM
Metodika laboratorního zpracování
Provedli jsme postupně se zvyšující ředění 24 hodinové axenické kultury Trichomonas vaginalis.
U každého ředění jsme zjistili množství TV v inokulační dávce 10 µl (viz výsledná tabulka).
Vytvořili jsme tři alikvoty od každého ředění a provedli výše uvedená vyšetření. Odečty výsledků jsme zaznamenali do databáze.
Test jsme prováděli ve třech sériích, vždy po 14 vzorcích + pozitivní/negativní kontrola. V tabulce 1 je každá série označená jinou barvou.
| ředění | TV1 | TV2 | TV3 | R1 | R2 | R3 | G1 | G2 | G3 | K1 | K2 | K3 | |
| 1 | PK | 38 550 | 33 350 | 19 200 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 2 | 1:10 | 9 700 | 8 050 | 1 150 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 3 | 1:30 | 3 000 | 1 200 | 80 | 1 | 1 | 0 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 4 | 1:50 | 1 500 | 1 350 | 300 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 5 | 1: 70 | 300 | 500 | 100 | 1 | 1 | 0 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 6 | 1:100 | 500 | 500 | 50 | 1 | 1 | 0 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 7 | 1:200 | 100 | 150 | 50 | 1 | 1 | 0 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 8 | 1:300 | 200 | 100 | 25 | 1 | 0 | 0 | 1 | 1 | 0 | 1 | 1 | 1 |
| 9 | 1:500 | 50 | 50 | 25 | 0 | 0 | 0 | 1 | 1 | 0 | 1 | 1 | 1 |
| 10 | NK | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
Popis tabulky
Provedeny tři série vyšetření, série 1-3 označeny barevně.
TV1-TV3 počet trichomonád na 10 µl v sérii 1-3
R1-R3 rapid test vyšetření rapid testem v sérii 1-3;0=NEGATIVNÍ,1=POZITIVNÍ
G1-G3 mikroskopický odečet po obarvení v sérii 1-3;0=NEGATIVNÍ,1=POZITIVNÍ
K1-K3 kultivační vyšetření v sérii 1-3;0=NEGATIVNÍ,1=POZITIVNÍ
PK pozitivní kontrola
NK negativní kontrola
Metodika statistického zpracování
Pro popis dat byla použita základní popisná statistika (medián, ar. průměr, směrodatná odchylka (sd), minimální a maximální hodnota).
Pro grafické znázornění byly použity krabicové grafy (dolní hrana krabice je 25. percentil, uvnitř krabice – medián, horní hrana krabice je 75. percentil).
Počty TV/10 µl byly kategorizovány na dvě skupiny 0 (neg.)/>0 (poz.). Srovnání s uvedenými kategoriemi a výsledky testů byly hodnoceny pomocí testu symetrie na hladině významnosti 5 %. Kvalita testu byla hodnocena na základě senzitivity, specificity a dále byla vyjádřena pozitivní a negativní prediktivní hodnota. Pro úplnost je uvedena také area pod ROC křivkou (max. hodnota 1, čím vyšší hodnota, tím lepší shoda výsledků).
Pro vyhodnocení byl použit program Stata verze 17.
Výsledky
1. Popis počtu TV/10
Rapid test hodnotil negativní výsledky v rozmezí 0-100 TV/10 µl, pozitivní výsledky od 100 a do
38 550 (tab. 2, obr. 1).
| Počet TV/10 µl | počet | medián | ar. průměr | sd | min. | max. | |
| Celkem | 30 | 250 | 4004,3 | 9580,3 | 0 | 38550 | |
| Rapid | Negativní | 12 | 50 | 44,2 | 36,0 | 0 | 100 |
| Pozitivní | 18 | 1175 | 6644,4 | 11752,4 | 100 | 38550 | |
| Giemsa | Negativní | 5 | 0 | 10 | 13,7 | 0 | 25 |
| Pozitivní | 25 | 500 | 4803,2 | 10340,0 | 50 | 38550 | |
| Kultivace | Negativní | 3 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| Pozitivní | 27 | 300 | 4449,3 | 10015,8 | 25 | 38550 | |
2. Srovnání výsledků a kategorií dle počtu TV/10 µl
Na základě statistického vyhodnocení byl zjištěn statisticky významný rozdíl (p = 0,002) mezi výsledky Rapid testu a kategoriemi počtu TV/10 µl. Z 27 vzorků s počtem TV/10 µl větším než 0 bylo 9 (33 %) vyhodnoceno jako falešně negativní (tab. 3).
Ostatní metody se statisticky významně od kategorií dle počtu TV/10 ul nelišily. U kultivace byla zjištěna 100% shoda, u mikroskopického vyšetření Giemsa byly zjištěny 2 falešně negativní vzorky.
| počet TV/10 µl | |||||
| Test | kategorie | 0 | >0 | Celkem | p-hod.* |
| Celkem | 3 | 27 | 30 | ||
| Rapid | neg. | 3 | 9 | 12 | 0,003 |
| poz. | 0 | 18 | 18 | ||
| Giemsa | neg. | 3 | 2 | 5 | 0,157 |
| poz. | 0 | 25 | 25 | ||
| Kultivace | neg. | 3 | 0 | 3 | 1,000 |
| poz. | 0 | 27 | 27 | ||
*neparametrický test symetrie
3. Senzitivita a specificita
Senzitivita u Rapid testu byla 67 %, specificita 100 %. Negativní prediktivní hodnota byla jen 25 %. A tomu odpovídá také hodnota plochy pod ROC křivkou 0,833 (tab. 4).
Nejsenzitivnější je metoda kultivace (100 %) a tomu také odpovídá nejvyšší hodnota plochy pod ROC křivkou 1.
| Bodový odhad | 95% IS | |||
| Počet TV/ 10 µl | >0 | 90,0 % | 73,4 % | 97,9 % |
| Rapid | Sensitivity | 66,7 % | 46,0 % | 83,5 % |
| Specificity | 100 % | 29,2 % | 100 % | |
| PPV | 100 % | 81,5 % | 100 % | |
| NPV | 25,0 % | 5,5 % | 57,2 % | |
| ROC area | 0,833 | 0,743 | 0,924 | |
| Giemsa | Sensitivity | 92,6 % | 75,7 % | 99,1 % |
| Specificity | 100 % | 29,2 % | 100 % | |
| PPV | 100 % | 86,3 % | 100 % | |
| NPV | 60 % | 14,7 % | 94,7 % | |
| ROC area | 0,963 | 0,913 | 1 | |
| Kultivace | Sensitivity | 100 % | 87,2 % | 100 % |
| Specificity | 100 % | 29,2 % | 100 % | |
| PPV | 100 % | 87,2 % | 100 % | |
| NPV | 100 % | 29,2 % | 100 % | |
| ROC area | 1 | 1 | 1 | |
IS – interval spolehlivosti, PPV – pozitivní prediktivní hodnota, NPV – negativní prediktivní hodnota, ROC area – plocha pod Receiver Operating Characteristic křivkou
Shrnutí statistického zpracování
Srovnání testu bylo povedeno na 30 vzorcích, kdy počty TV/10 µl se pohybovaly od 0 do 38 550. Celkem u 3 (10 %) vzorků byla hodnota 0, tyto vzorky byly označeny jako negativní.
Rapid test vyhodnotil jako pozitivní vzorky od hodnoty 100. Výsledky Rapid testu se významně lišily od hodnocení dle kategorií dle počtu TV/10 µl.
Senzitivita Rapid testu vyšla 67 % (95% IS: 46,0-83,5 %). Specificita 100 %.
Nejsenzitivnější test je kultivace (100 %).
Závěr
Rapid test od firmy Osom nás překvapil svou citlivostí, neboť jako pozitivní vzorky vyhodnotil již vzorky s objemem 100 TV/ 10µl.
Z našeho pohledu, vzhledem k jednoduchosti a rychlosti testu, vidíme jeho využití v ordinacích gynekologů nebo ve volném prodeji v lékárnách k samotestování.
Pro klinické laboratoře jednoznačně doporučujeme ponechat zlatý standart ve vyšetřování Trichomonas vaginalis, tj. mikroskopické vyšetření poševního stěru barveného dle Giemsa – Romanowski spolu s kultivací T.vaginalis. Možná je také PCR diagnostika v rámci STD panelu.
MVDr. Romana Mašková, Mgr. Danuše Vaňková, doc. Ing. Hana Tomášková, Ph.D.
Aktuality
Vyhlašovatel oznamuje svůj úmysl zadat veřejnou soutěž s výše uvedeným názvem dle § 1772 a násl. zákona č. 89/2012 Sb., občanský zákoník, dle pravidel pro veřejnou soutěž o nejvhodnější nabídku. Tímto Vás vyzývá k podání nabídky do této veřejné soutěže.
Vánoční provoz pokladny v Ostravě
Během vánočních svátků 23.12 -31.12.2024 bude zkrácena provozní doba pokladny v Ostravě pouze do 13.30 hod.
Nabídka zaměstnání
Prohlédněte si nové pracovní nabídky
Odběry vzorků na konci roku 2024
Termíny pro letošní výsledky analýz vzorků.
Evropský testovací týden
Poradny Zdravotního ústavu se sídlem v Ostravě se připojí k Evropskému testovacímu týdnu HIV a rozšíří provozní dobu.
Zobrazit všechny aktuality
